一、新生鼠缺氧缺血性脑损伤热休克蛋白70的表达（论文文献综述）
孙诗杰[1]（2021）在《温阳逐瘀汤对肾阳虚证大鼠局灶性脑缺血后微小RNA-210及其靶基因的影响》文中指出目的:观察温阳逐瘀汤对肾阳虚证大鼠脑缺血损伤后微小RNA-210及其靶基因Ephrin-A3表达的影响,探讨温阳逐瘀汤防治肾阳虚证大鼠脑缺血损伤的可能作用机制。方法:将192只成年健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白组（n=48）和肾阳虚证组（n=144）。肾阳虚证组予以肌注氢化可的松21d后,采用酶联免疫法（ELISA）检测血浆中环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的含量,再将肾阳虚证组分为假手术组、模型组和温阳逐瘀汤组（n=48）,并按术后1d、3d、7d、14d四个取材时间点分为4个亚组（n=12）。除空白组外,各组采用改良的Longa线栓法制备大鼠中动脉梗塞模型,其中假手术组在大鼠颈内动脉插入线栓8mm,空白组正常饲养自由饮食;假手术组、模型组术后灌胃蒸馏水;温阳逐瘀汤组术后灌胃温阳逐瘀汤。根据Longa的5分制法对大鼠进行神经功能损伤评分,采用HE染色评估脑组织病理学损伤情况;实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）法检测大鼠缺血侧皮质区miR-210、Ephrin-A3 mRNA的表达水平;免疫蛋白印迹法（Western blot）检测大鼠缺血侧皮质区Ephrin-A3蛋白的表达量。使用SPSS24.0统计软件进行数据分析。结果:（1）肾阳虚特异性指标:与空白组比较,造模后肾阳虚组大鼠血浆中cAMP含量降低,cGMP含量升高（P<0.01）;与模型组比较,灌胃后温阳逐瘀汤组cAMP含量升高,cGMP含量降低（P<0.01）。（2）神经功能缺损评分:同一时间点,与假手术组相比,模型组和温阳逐瘀汤组均有不同程度的神经功能缺损（P<0.01）;与模型组比较,温阳逐瘀汤组的神经功能缺损均有不同程度的改善（P<0.01）。（3）脑组织形态学改变:空白组、假手术组神经元形态完整,未发生明显病理改变;模型组神经元萎缩变形,大部分神经元坏死、凋亡,伴有炎性细胞浸润,呈明显的缺血性损害改变;温阳逐瘀汤组缺血区虽仍有少量的神经元坏死,但与模型组相比细胞排列逐渐密集整齐,核固缩深染范围缩小,胞核逐渐清晰,炎性细胞浸润改善。（4）相同时间点miR-210、Ephrin-A3mRNA的表达:与假手术组比,模型组和温阳逐瘀汤组miR-210、Ephrin-A3 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组相比,温阳逐瘀汤组miR-210的表达高于模型组,温阳逐瘀汤组Ephrin-A3 mRNA的表达水平低于模型组,差异均有统计学意义（P<0.01）。（5）同一时间点Ephrin-A3蛋白的表达:与假手术组相比,模型组和温阳逐瘀汤组Ephrin-A3蛋白表达量均有增加（P<0.01）;与模型组相比,温阳逐瘀汤组中Ephrin-A3的表达减少（P<0.01）。结论:温阳逐瘀汤能够改善肾阳虚证脑缺血大鼠肾阳虚和神经功能缺损程度,并通过上调脑缺血损伤后miR-210的表达,对其靶基因进行负调控,这有可能是脑缺血损伤后诱导血管生成的机制之一。
秦玮珣[2]（2020）在《基于自噬和炎症探讨“智三针”改善HIBD大鼠认知障碍分子机制》文中研究表明目的:本课题旨在研究“智三针”改善宫内窘迫缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）模型大鼠认知行为障碍的内在机制。探讨智三针对HIBD大鼠脑部海马区受损神经元病理变化的影响;从NLRP3炎症体活化机制切入,阐明智三针通过调控HIBD大鼠神经元自噬流的强度从而抑制NLRP3炎症体活化,改善神经元损伤的作用通路,为针刺治疗围产期缺氧缺血性脑病的机制研究提供理论依据。方法:采用延迟10分钟剖宫产方法复制宫内窘迫HIBD新生大鼠模型。在新生大鼠出生后第15天给予针刺干预（“智三针”包括神庭穴、双侧本神穴）,每天干预1次,每次留针10分钟,连续14天。本研究共分为四部分:（1）第一部分实验评价针刺对HIBD大鼠生长发育状况的影响,包括体重测定和mNSS神经功能缺损评分;（2）第二部分实验应用旷场试验、新物体识别实验和物体位置识别实验评价针刺对HIBD新生大鼠行为认知能力的影响;通过测定大脑湿重和冠状面、矢状面、水平面的直径评价HIBD大鼠脑部水肿与萎缩变化及针刺对其的影响;应用HE染色、Nissl染色观察针刺对HIBD大鼠海马形态和神经元结构的影响;应用TUNEL荧光染色观察针刺对HIBD大鼠海马神经元凋亡的影响;应用免疫组化观察针刺对HIBD大鼠神经元标志物NeuN和NF200的平均光密度值的影响,初步阐明针刺改善HIBD大鼠行为认知能力的病理学机制;（3）第三部分实验应用ELISA技术检测氧化应激相关指标ROS、MDA、SOD、GSH-px和炎症相关因子TNF-α、IL-1β、IL-18的表达,探讨针刺对HIBD大鼠血清氧化应激与炎症反应的影响;应用Western Blotting技术分别在PND1、PND3、PND7、PND14（针刺前）和PND28（针刺后）五个时间节点检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ、P62、Lampl、Cathepsin D、Beclin 1 和 NLRP3 炎症体相关蛋白 NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、GSDMD的表达,探讨宫内窘迫HIBD大鼠脑部自噬与炎症反应随着缺血后再灌注的变化以及针刺对HIBD大鼠脑部自噬与NLRP3炎症体相关蛋白表达的影响;（4）第四部分实验添加了自噬激活剂RAPA（雷帕霉素）和抑制剂 CQ（氯喹）,应用时序记忆测试和情景记忆测试观察针刺对HIBD大鼠行为认知能力的影响;应用Western blotting技术检测针刺对HIBD大鼠海马自噬相关蛋白LC3Ⅱ、P62、Lamp1、mTOR、p-mTOR和NLRP3炎症体活化相关指标NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、GSDMD的表达的影响;应用Real-time PCR技术检测针刺对HIBD大鼠相关基因Map1lc3a、Lampl、Khdrbs1、Nlrp3、Pycard、Gsdmd对应mRNA相对表达量的影响,进一步在分子基因层面阐明智三针通过调控自噬流的强度抑制NLRP3炎症体的活化从而减轻细胞死亡保护受损神经元的机制作用。结果:1.第一部分实验结果延迟10分钟剖宫产方法复制宫内窘迫HIBD新生大鼠模型。分别在各组大鼠PND3、PND7、PND14、PND21和PND28比较各组大鼠体重,结果显示在PND3,HIBD造模导致的缺血缺氧使新生大鼠体重减轻;在PND7和PND14,随着生长时间的增加,HIBD大鼠生长速度明显弱于正常分娩的大鼠;在PND21,HIBD导致新生大鼠体重增长缓慢,针刺干预7天后无显着变化;在PND28,HIBD模型大鼠体重增长缓慢,生长受到限制,而针刺干预14d有利于HIBD大鼠体重增长。各组大鼠改良后的mNSS神经功能缺损评分结果显示HIBD造模的大鼠神经功能明显受损,模型制作成功;针刺能有效改善HIBD模型大鼠的受损神经功能。2.第二部分实验结果（1）旷场实验结果在针刺干预7d后,HIBD模型鼠的旷场探索能力无明显改善作用。在针刺干预14d后,结果显示针刺可以显着提高HIBD模型鼠的旷场水平运和中央区探索能力,但无法明显改善HIBD大鼠旷场垂直探索能力且对HIBD大鼠的情绪影响不明显。（2）新物体识别实验和物体位置识别实验结果各组大鼠均可以识别新旧物体和物体位置。针刺可显着提升HIBD大鼠的新物体辨别能力和对物体位置的识别能力。（3）各组大鼠大脑湿重及各切面直径HIBD造模并未对使大鼠大脑产生明显水肿或萎缩;针刺对HIBD模型鼠的大脑大小和重量无明显影响。（4）各组大鼠脑部海马区HE染色结果正常组大鼠海马锥体细胞结构清晰,呈多角形,排列紧密整齐,胞核饱满,核仁深染清晰可见;模型组大鼠海马的锥体细胞排列散乱,间隙变宽,细胞肿胀导致形态改变,边界不清,大部分神经元坏死形成空泡,核仁固缩;针刺组大鼠海马锥体细胞排列较整齐致密,少部分神经元肿胀坏死,部分核仁清晰可见,边界较清晰,提示针刺有助于改善HIBD受损神经元的形态与结构。（5）各组大鼠脑部海马区Nissl染色结果正常组大鼠海马区锥体细胞排列整齐规律,部分细胞质着色不全,有少量尼氏体在锥体层两侧,部分核仁有固缩现象;模型组大鼠海马锥体细胞排列散乱,间隙明显变宽,胞体肿胀形成空泡,着色不深,核仁明显固缩;针刺组大鼠海马锥体细胞排列较整齐致密,部分核仁清晰可见,边界较清晰。提示HIBD导致新生大鼠海马区神经元肿胀坏死,针刺可有效缓解HIBD大鼠海马区的病理形态。（6）各组大鼠脑部海马Tunnel荧光染色结果宫内窘迫缺氧缺血可引起新生大鼠海马区神经元凋亡从而引起脑损伤;针刺可明显改善HIBD大鼠的海马区神经元凋亡现象。（7）各组大鼠脑部海马区免疫组化结果缺氧缺血导致大鼠海马NeuN表达下降,神经元受损,模型组和假针刺组细胞着色较正常组浅,且细胞排列明显散乱,间距增大;针刺14d可以有效改善大鼠受损海马区NeuN的表达。缺氧缺血导致大鼠海马神经元受损或坏死,NF200表达量显着降低;针刺可以有效改善大鼠受损海马区NF200的表达。3.第三部分实验结果（1）各组大鼠血清氧化应激指标结果:HIBD造模导致大鼠机体释放大量活性氧引起氧化应激反应;针刺可以有效减少血清ROS和MDA浓度,降低氧化应激反应。HIBD造模导致大鼠机体SOD浓度下降;针刺可以有效升高血清SOD和GSH-Px浓度,促进清除氧化应激反应产生的氧离子自由基,减轻细胞损伤。HIBD造模导致大鼠机体释放大量细胞炎性因子使机体受损;针刺可以有效降低血清炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-18的浓度,减轻细胞受损程度。（2）HIBD大鼠海马神经元自噬流与焦亡相关蛋白表达结果在PND1,HIBD造模导致机体缺血缺氧,自噬作用被激活清楚受损细胞器,同时激活了大鼠海马区NLRP3炎症体的合成和焦亡作用。在PND3,HIBD导致的机体自噬流降解作用继续增强,同时NLRP3炎症体介导的焦亡作用在继续增强。在PND7,HIBD导致的机体自噬流降解作用继续增强,同时NLRP3炎症体持续活化。在PND14,HIBD大鼠海马自噬诱导持续增强,降解作用无明显改变,同时炎症反应继续增强,脑损伤加重。（3）智三针对HIBD大鼠海马神经元自噬与NLRP3炎症体活化的影响针刺干预后,模型组大鼠海马LC3Ⅱ表达明显升高、P62表达明显降低、LAMP1的表达升高;针刺组大鼠海马LC3Ⅱ、P62、LAMP1的表达明显升高,而假针刺组无明显变化,提示针刺干预抑制HIBD大鼠海马过量自噬流。此外,模型组大鼠海马NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、ASC、IL-1β、GSDMD 表达明显升高;针刺组大鼠海马NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、ASC、IL-1β、GSDMD 表达明显降低,提示针刺干预可有效抑制HIBD大鼠海马神经元焦亡反应,保护受损细胞。4.第四部分实验结果（1）行为学检测结果各组大鼠均可以识别物体出现的先后顺序以及是否与背景匹配。时序记忆测试结果显示:HIBD造模严重降低了大鼠对物体出现顺序的识别能力,抑制自噬流可以显着改善这一现象;经过RAPA干预后的HIBD模型鼠产生了过量的自噬流,而此时针刺已经无法使其下降,脑损伤在不断加重从而导致大鼠的记忆能力始终处于较低水平;CQ组抑制过量自噬流有缓解大鼠的记忆力低下的趋势。情景记忆测试结果显示:HIBD造模严重降低了大鼠识别物体是否与环境匹配的能力,抑制自噬流可以显着改善这一现象;RAPA干预后的HIBD模型鼠产生了过量的自噬流,针刺后自噬流受到抑制,脑损伤减轻从而使大鼠的记忆能力提升;CQ抑制了过量的自噬流可以有效提升大鼠的物体辨别及记忆能力。（2）各组大鼠自噬相关蛋白表达结果模型组大鼠海马LC3Ⅱ表达明显增高、P62表达降低、LAMP1表达升高、P-mTOR/totalmTOR值降低,提示HIBD造模导致的缺氧缺血激活大鼠神经元自噬作用;针刺组大鼠LC3Ⅱ表达升高、P62表达升高、LAMP1表达降低、P-mTOR/otal mTOR值升高,提示针刺抑制自噬流的降解;RAPA组大鼠的LC3IⅡ表达明显升高、P62表达降低、P-mTOR/total mTOR值降低,LAMP1呈升高趋势,提示自噬流被持续过量促进,而CQ组大鼠的LC3Ⅱ、P62、LAMP1、P-mTOR/total mTOR值均升高,提示自噬流降解被抑制;针刺+RAPA组LC3 Ⅱ、P62表达升高,针刺+CQ组LC3Ⅱ、P62表达降低,提示针刺抑制HIBD大鼠的过量自噬流作用。（3）各组大鼠NLRP3炎症体相关蛋白表达结果模型组大鼠海马 NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1、IL-1β、GSDMD 表达升高,提示HIBD造模导致的缺氧缺血使大鼠神经元NLRP3炎症体活化,焦亡反应加重;针刺组大鼠海马 NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1、IL-1β、GSDMD 表达降低,提示针刺抑制HIBD大鼠神经元NLRP3炎症体活化;RAPA组大鼠海马ASC、pro-caspase-1、IL-1ββ表达升高,提示自噬流增强促使炎症反应加重,CQ组大鼠海马NLRP3、ASC、pro-caspase-1、GSDMD表达降低,提示降低过量自噬流可抑制神经元炎症。针刺+RAPA组大鼠海马ASC、pro-caspase-1、IL-1β、GSDMD表达降低,提示针刺可适量降低HIBD大鼠神经元过量自噬流从而抑制细胞炎症。（4）各组大鼠Real-time PCR结果模型组大鼠海马LC3、P62、LAMP1 mRNA的相对表达量升高;针刺组大鼠LC3、LAMP1 mRNA的相对表达量升高,P62降低,提示针刺干预抑制HIBD大鼠产生的过量自噬流;RAPA组大鼠LC3、P62、LAMP1 mRNA的相对表达量升高,提示RAPA促进HIBD大鼠自噬流增强;CQ组大鼠P62mRNA的相对表达量降低,提示CQ通过抑制自噬底物的生成进而抑制自噬。针刺+RAPA组P62 mRNA的相对表达量降低,提示针刺通过抑制自噬底物的生成抑制过量自噬流。此外,模型组大鼠海马NLRP3、ASC、GSDMD mRNA的相对表达量升高,针刺组大鼠海马NLRP3、ASC、GSDMD mRNA的相对表达量降低,提示针刺干预抑制HIBD大鼠细胞焦亡;RAPA组大鼠海马NLRP3、GSDMD mRNA的相对表达量升高,提示自噬流增强加重HIBD大鼠细胞焦亡;CQ组大鼠海马NLRP3、ASC、GSDMD mRNA的相对表达量降低,提示阻断自噬降解可以有效降低HIBD大鼠的焦亡反应。针刺+RAPA组NLRP3 mRNA相对表达量降低,针刺+CQ组NLRP3 mRNA相对表达量升高,提示针刺抑制NLRP3的生成进而抑制NLRP3炎症体活性,减弱HIBD大鼠的神经元焦亡反应。结论:本研究证实“智三针”改善宫内窘迫HIBD新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的可能机制是:通过调控大鼠海马区因缺氧缺血产生的自噬流,进而抑制神经元中NLRP3炎症体的活化,减少细胞死亡,保护受损神经元。
林泽璇[3]（2020）在《重组人粒细胞集落刺激因子对缺氧缺血新生大鼠运动功能的改善作用》文中指出研究目的探讨rhG-CSF对缺氧缺血新生大鼠细胞凋亡及运动功能的影响,为深入研究rhG-CSF的脑保护作用提供实验依据。研究方法本实验选用65只生后7天大（Postnatal 7 days,P7）的SPF级SD大鼠,来源于南方医科大学实验动物中心,不分雌雄,体重13-18g,将SD新生大鼠随机分为两大组,第一组为急性期处理组,第二组为长期处理组,为21天大的SD大鼠。每个大组里设3个小组:（1）Sham组:不做缺氧缺血处理、仅腹腔注射生理盐水;（2）HI组:缺氧缺血、腹腔注射生理盐水;（3）HI+rhG-CSF组:缺氧缺血、腹腔注射rhG-CSF,剂量50μg/kg,1次/天。急性期处理组（TTC及荧光染色处理）的动物共注射药物2次,长期处理组（Catwalk步态分析）的动物共注射药物5次,控制每日同一时间注射。根据Rice-Vannucci法,对P7的大鼠手术结扎右侧颈总动脉后,在密闭缺氧箱中缺氧150min。对P9的大鼠实施负向趋地反射、翻正反射、悬吊测试,每只大鼠每项测试重复3次,记录大鼠完成动作所需的时间。在P9取各组实验鼠大脑做荧光染色,每只大鼠大脑随机取5个视野拍摄,计算红绿荧光比值。在P9取实验鼠大脑,去除脑干及嗅球后,将大脑均匀切成5片,每片厚度约2mm,加入TTC染液后静置、拍摄,计算各个脑片的梗死面积比例。在P21时,分别使用Catwalk XT系统分析自由活动的实验鼠步态,计算大鼠各肢体的站立时间、步替周期、步伐长度、摆动速度、最大接触面积、平均强度等参数。实验过程中,每2天对实验鼠称重1次,计算体重的增长值。研究结果1.体重增长情况:与Sham组相比,HI组乳鼠体重增长值明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）;与HI组相比,在P7至P9、P9至P11、P13至P15、P15至P17、P19至P21五个阶段中,HI+rhG-CSF组乳鼠体重增长值明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）;与HI组相比,在P11至P13、P17至P19两个阶段中,HI+rhG-CSF组乳鼠体重增长值增加,差异无统计学意义（P>0.05）,但有增加趋势。2.急性期行为学评估结果:与Sham组相比,HI组乳鼠神经行为明显恶化,差异有统计学意义（P<0.05）;与HI组相比,HI+rhG-CSF组乳鼠神经行为明显改善,差异有统计学意义（P<0.05）。3.TTC染色结果:与Sham组相比,HI组与HI+rhG-CSF组乳鼠的脑梗死面积均明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）;与HI组相比,HI+rhG-CSF组的脑梗死面积明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）。4.荧光染色结果:与Sham组相比,HI组与HI+rhG-CSF组乳鼠的红绿荧光比值均明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）;与HI组相比,HI+rhG-CSF组的红绿荧光比值明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。5.Catwalk步态分析结果:与Sham组相比,HI组乳鼠的站立时间、步替周期均明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）;与Sham组相比,HI组乳鼠的步伐长度、摆动速度、最大接触面积、平均强度均明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）;与HI组相比,HI+rhG-CSF组乳鼠的站立时间、步替周期均明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）;与HI组相比,HI+rhG-CSF组乳鼠的步伐长度、摆动速度、最大接触面积、平均强度均明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。研究结论与Sham组相比,缺氧缺血会增加新生大鼠脑细胞凋亡,降低其体重增长速度及损伤运动功能。这种对运动功能的损害在急性期表现为在翻正反射、负向趋地反射、前肢悬吊测试过程中,新生大鼠的动作迟缓、完成动作所需的时间延长;在远期表现为步态异常,包括动作迟缓及肢体僵直,完成动作所需时间延长、速度缓慢、爪印与地面的接触面积减少、爪印整体凌乱等;应用rhG-CSF腹腔注射有改善缺氧缺血新生大鼠运动功能的作用,可减轻实验动物动作迟缓及肢体僵直的程度。
曾贤威[4]（2019）在《新生期缺血缺氧对小鼠成年后抑郁症易感性及海马免疫细胞变化的影响》文中指出[目的]新生期采用单侧颈总动脉结扎法（Vannucci）结合8%低氧环境建立HIBD模型,成年期后采用慢性不可预见性温和应激（Chronic Unexpected Mild Stress,CUMS）建立抑郁症模型,探讨小鼠新生儿时期经受缺血缺氧性脑损伤后成年期罹患抑郁症的易感性及其涉及的免疫学机制,为卒中后抑郁的机制研究和临床药理学研究提供一定的参考意义。[方法]将体重4-6g出生后第9天（P9）雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组（Sham）和缺血缺氧组（HIBD）,采用左侧颈总动脉结扎法（Vannucci）建立HIBD模型,然后在环境温度为34℃-34.5℃,8%02+92%N2的混合气体中暴露45min。HIBD动物模型建立后,将存活的小鼠和假手术组（Sham）小鼠置于21%O2,温度为28℃的环境中连续饲养至成年期。第6周起（P42天）,从HIBD模型小鼠中随机选取体重18-23g的小鼠随机分为缺血缺氧（HIBD）+空白对照组（control）和缺血缺氧（HIBD）+慢性应激组（CUMS）;从假手术组（Sham）小鼠中随机分成假手术（Sham）+空白对照（control）和假手术（Sham）+慢性应激组（CUMS）,实验组及对照组小鼠C57BL/6J每4只一笼,正常喂养。每天给予Sham+CUMS组和HIBD+CUMS组小鼠一种慢性不可预见性温和应激,建立抑郁症小鼠模型,而Sham+control组与HIBD+control组小鼠则不予应激,但饲养条件相同。通过The grip test、Hangingtest、体重和激光散斑血流成像判断HIBD模型是否建立成功;通过一系列行为学实验,包括悬尾实验、强迫游泳实验、糖水偏好实验,观察小鼠是否存在抑郁样行为;采用黑白箱实验和三箱实验观察小鼠是否存在焦虑样行为及社交功能障碍;最后应用流式细胞术检测小鼠海马组织中单核细胞、小胶质细胞、B淋巴细胞和T淋巴细胞的含量。[结果]第一部分新生鼠缺血缺氧性脑损伤模型（HIBD）的建立与评价1.从激光散斑血流成像结果显示,与Sham组相比,轻度损伤组（HIM）与重度损伤组（HIS）左侧损伤区脑血流明显下降（HIM vs Sham,F=27.44,p=0.01;HIS vs Sham,F=27.44,p<0.01）;HIS组左侧损伤区血流量比HIM组显着下降（HIS vs HIM,F=27.44,p=0.04）,而右侧未损伤区各组脑血流量无差别。2.神经功能缺损评分显示,其中Thegriptest,术后P10-P12,HIM组与HIS组抓握评分均明显低于 Sham 组（HIM vs Sham,p<0.05;HIS vs Sham,p<0.05）;PI 1-P12,HIS 组抓握评分比 HIM 组下降显着（HIS vs HIM,p<0.05）。在 Hanging test中,P10-P11,HIS组悬吊时间均比Sham组悬吊时间短（HIS vs Sham,p<0.05）,而HIM组与Sham无差别;P12,与Sham组相比,HIM组和HIS组悬吊时间下降明显（HIM vs Sham,F=10.38,P=0.048;HIS vs Sham,F=10.38,p<0.01）。3.体重结果显示,HIM组和HIS组小鼠体重增长较Sham组缓慢（p<0.001）,而HIS组体重增加更加缓慢（p<0.001）。从术后第一天起（P10-P16）,HIM组及 HIS 组体重均较 Sham 组低（HIM vs Sham,p<0.05;HIS vs Sham,p<0.05）;在 P14-P16,HIS 组体重较 HIM 组显着降低（HIS vs HIM,p<0.05）。第二部分抑郁模型的建立与评价1.TST结果显示,与Sham组相比,应激前HIBD组静止不动时间（immobility time）低（Shamvs HIBD,t=2.35,p=0.024）,随着慢性应激的开始,Sham+CUMS组与HIBD+CUMS组其静止不动时间均逐渐延长（F=5.623,p=0.001）,从第1周至第3周,Sham+CUMS组静止不动时间均比HIBD+CUMS组长（Sham+CUMS vs HIBD+CUMS,p<0.05）,到第4周,两组之间无差别。2.FST结果显示,慢性应激前,HIBD组静止不动时间比Sham组短（HIBD vs Sham,t=2.46,P=0.019）。随着慢性应激的开始,Sham+CUMS 组与 HIBD+CUMS组其静止不动时间均逐渐延长（F=11.731,p<0.001）,第3周起,Sham+CUMS组与HIBD+CUMS组静止不动时间均比Sham+control组与HIBD+control组长（Sham+CUMS vs Sham+control,p<0.05;HIBD+CUMS vs HIBD+control,p<0.05）,但Sham+CUMS组与HIBD+CUMS组之间无差别。3.糖水偏好实验结果显示,从第1周开始,Sham+CUMS组小鼠糖水偏好率便开始降低（F=33.218,p<0.001）,均较 Sham+control 组低（Sham+CUMS vs Sham+control,p<0.05）,而HIBD+CUMS组小鼠偏好率较对照组低则从第2周起（HIBD+CUMS vs HIBD+control,p<0.05）。4.体重结果显示,慢性应激前,HIBD组小鼠体重较Sham组低（HIBD vs Sham,t=5.83,p<0.01）。慢性应激后,HIBD+CUMS 组与 Sham+CUMS 组小鼠体重均较 HIBD+control 组与 Sham+control 组低（HIBD+CUMS vs HIBD+control,p<0.05;Sham+CUMS vs Sham+control,p<0.05）,但 HIBD+CUMS 与Sham+CUMS组之间无差别。5.黑白箱实验结果显示,从第1周开始,HIBD+CUMS组及Sham+CUMS组小鼠明箱累积时间逐渐降低（F=5.321,p=0.004）,HIBD+CUMS组均较对照组减低（HIBD+CUMS vs Sham+CUMS,p<0.01）,慢性应激第 3 周,Sham+CU MS组明箱累积时间较对照组下降（Sham+CUMS vs Sham+control,p<0.05）,慢性应激第4周,HIBD+CUMS组小鼠明箱累积时间较Sham+CUMS组低（HI BD+CUMS vs Sham+CUMS,F=14.38,p=0.029）。6.三箱实验结果显示,从第2周起,HIBD+CUMS组小鼠闻嗅时间（sniff time）均比 HIBD+control 组降低（HIBD+CUMS vs HIBD+control,p<0.05）,而Sham+CUMS组小鼠闻嗅时间则在第3周起逐渐下降（F=10.759,p<0.001）;慢性应激第4周,HIBD+CUMS组小鼠闻嗅时间比Sham+CUMS组低（HIBD+CUMS vs Sham+CUMS,F=30.89,p=0.015）。在社交主动性阶段（Socialbility）,第一周起Sham+CUMS组及HIBD+CUMS组社交主动性系数（S1/（Sl+E））逐渐降低（F=4.686,p=0.004）,在第4周中,HIBD+CUMS组小鼠社交主动性系数比Sham+CUMS 组降低显着（HIBD+CUMS vs Sham+CUMS,F=8.00,p=0.012）。在社交记忆阶段（Socialmemory）,从第一周起,HIBD+CUMS组小鼠社交记忆系数（S2/（S1+S2））均较对照组降低（HIBD+CUMS vs HIBD+control,p<0.05）,而Sham+CUMS组小鼠社交记忆系数则在第4周较对照组降低（Sham+CUMS vs Sham+control,F=24.24,p=0.031）,HIBD+CUMS 组小鼠社交记忆系数比Sham+CUMS 降低明显则出现在第 1、3 和 4 周（HIBD+CUMS vs Sham+CUMS,p<0.05）。第三部分卒中后抑郁小鼠海马免疫细胞表达情况流式细胞术结果显示,Sham+CUMS组MDMs（CD45high/CD11b+）百分比与对照组相比出现增高（Sham+CUMS vs Sham+control,F=7.08,p=0.049）,HIBD+CUMS 则出现降低（HIBD+CUMS vs HIBD+control,F=7.08,p=0.014）;Sham+CUMS 组 MC（CD45low/CD 11 b+）百分比降低（Sham+CUMS vs Sham+control,F=7.09,p=0.049）,HIBD+CUMS组MC（CD45low/CD11b+）百分比增高（HIBD+CUMS vsHIBD+control,F=7.09,p=0.014）;Sham+CUMS 组 B 淋巴细胞（CD45+CD19+）百分比增高（Sham+CUMS vs Sham+control,F=19.39,p=0.002）,而 HIBD+CUMS 组则降低（HIBD+CUMS vs HIBD+control,F=13.39,p<0.01）;Sham+CUMS 组 T 淋巴细胞（CD45+CD4+）百分比增高（Sham+CUMS vs Sham+control,F=6.55,p=0.004）,HIBD+CUMS 组 T 淋巴细胞（CD45+CD4+）百分比降低（HIBD+CUMS vs HIBD+control,F=6.55,p=0.05）;HIBD+CUMS 组T 淋巴细胞（CD45+CD8+）百分比降低（HIBD+CUMS vs HIBD+control,F=2.89,p=0.041）。[结论]1.出生后第9天采用Vannucci法制备缺血性脑损伤小鼠,通过激光散斑血流成像、神经功能评定及体重变化的结果,证明成功建立缺血缺氧性脑损伤（HIBD）模型。2.成年期（6w）给予慢性不可预见性温和应激（CUMS）后,通过FST、TST静止不动时间（immobility time）逐渐增加,糖水偏好率逐渐下降以及体重增长缓慢等结果证明成功建立抑郁症小鼠模型。而FST及TST结果提示了缺血缺氧性脑损伤增加了成年后小鼠抑郁症的易感性,HIBD小鼠抑郁样行为的基础水平较低。3.HIBD模型组小鼠的焦虑样行为及社交功能与假手术组无明显差异,但随着慢性应激的进行,HIBD组小鼠焦虑样行为及社交功能受损更加显着。4.新生鼠经历缺血缺氧等负性应激事件后,成年期罹患抑郁症的发病机制可能涉及到脑内免疫细胞的参与,具体可能表现为单核细胞表达的下调、B淋巴细胞（CD19+）及T淋巴细胞（CD4+、CD8+）表达的下调和小胶质细胞表达的上调。
尹向云[5]（2018）在《氙气调节脑组织中microRNA-210和HIF-1α对新生大鼠脑白质损伤的保护作用研究》文中提出第一部分3日龄新生大鼠脑白质损伤模型建立的研究目的:通过给3日龄新生大鼠腹腔内注射脂多糖及联合缺氧缺血途径制造新生鼠脑白质损伤（white matter damage,WMD）模型,探讨早产儿脑白质损伤动物模型的建模方法。方法:将3日龄Sprague-Dawley（SD）新生大鼠96只随机分为4组,分别为NS组（n=24）、LPS组（n=24）、NS+HI组（n=24）、LPS+HI组（n=24）。NS组腹腔内注射生理盐水（0.05mg/kg）后不做任何处理;LPS组腹腔内注射脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）（0.05mg/kg）后不进行缺氧缺血（Hypoxia-Ischemia,HI）处理;NS+HI组腹腔内注射等量生理盐水3小时候后,结扎其右侧劲总动脉后置于低氧箱中（8%氧气+92%氮气混合气体）1小时;LPS+HI组腹腔注射LPS（0.05mg/kg）3小时后结扎其右侧劲总动脉后置于低氧箱中（8%氧气+92%氮气混合气体）1小时。上述四组分别于处理后0h、24h、48h、72h各取6只新生鼠行多聚甲醛灌注,取右侧脑室周围脑白质组织,进行脑组织HE染色、TUNEL检测细胞凋亡,明确新生大鼠脑白质损伤情况。结果:（1）HE染色脑组织病理变化:NS组脑组织结构未见细胞坏死;LPS组和NS+HI组大鼠脑组织未见明显的细胞坏死;LPS+HI组新生鼠脑室周围脑白质组织结构疏松化,细胞结构排列紊乱,可见细胞发生核固缩,可见核碎裂。（2）TUNEL染色细胞凋亡变化:NS组几乎无细胞凋亡,LPS组和NS+HI组无明显细胞凋亡;LPS+HI组48h细胞凋亡明显,72h细胞凋亡达高峰。结论:（1）单独腹腔注射小剂量脂多糖或短时间缺氧缺血不能造成新生大鼠脑白质损伤。（2）脂多糖联合缺氧缺血可成功建立新生大鼠脑白质损伤模型。第二部分氙气对新生大鼠脑白质损伤脑组织microRNA-210和HIF-1α表达的影响目的:对3日龄脑白质损伤新生大鼠给予氙气（Xenon,Xe）干预,通过检测脑组织内microRNA-210（mi R-210）及缺氧诱导因子1α（hypoxia induced factor 1α,HIF-1α）表达水平,探讨氙气治疗新生大鼠脑白质损伤的分子基础及神经保护作用机制。方法:将3日龄Sprague-Dawley（SD）新生大鼠120只随机分为3组,分别为NS组（n=24）、LPS+HI组（n=24）、LPS+HI+Xe组（n=72）。NS组腹腔内注射等量生理盐水后不做任何处理;LPS+HI组给予腹腔注射LPS（0.05mg/kg）3小时后结扎其右侧劲总动脉后置于低氧箱中（8%氧气+92%氮气混合气体）1小时,不进行氙气干预。LPS+HI+Xe组给予腹腔注射LPS（0.05mg/kg）3小时后结扎其右侧颈总动脉,置于低氧环境中（8%氧气+92%氮气混合气体）1小时后,随机分成LPS+HI+Xe1组LPS+HI+Xe2组和LPS+HI+Xe3组（每组n=24）。分别于建模后0h、2h和5h开始给予氙气吸入（50%氙气+30%氧气+20%氮气）3h。各组大鼠分别于上述处理后0h、24h、48h、72h各取6只新生鼠给予4%多聚甲醛灌注取脑,右侧脑室周围白质组织行HE染色、TUNEL检测细胞凋亡、实时荧光定量RT-PCR法检测microRNA-210的表达及Western blot检测HIF-1a蛋白含量。结果:（1）HE染色脑组织病理变化:NS组脑组织结构未见细胞坏死;LPS+HI组新生鼠脑室周围脑白质组织疏松化,细胞结构排列紊乱,可见细胞发生核固缩,可见核碎裂;氙气干预各亚组,可见脑白质染色淡染,结构相对较完整,较少细胞变性坏死,病理变化较脑损伤组明显减轻,各亚组之间HE染色脑组织病理变化无明显差异。（2）TUNEL染色细胞凋亡变化:NS组几乎无细胞凋亡;LPS+HI组48h细胞凋亡明显,72h细胞凋亡达高峰;LPS+HI+Xe1组细胞凋亡数目明显减少,差异有统计学意义（p<0.05）。LPS+HI+Xe1组、LPS+HI+Xe2组和LPS+HI+Xe3组细胞凋亡数目无明显差异。（3）RT-PCR检测mi R-210含量:与NS组相比较,LPS+HI组在各时间点,新生大鼠脑室周围组织mi R-210的表达水平均明显增加,差异有统计学意义（p<0.05）;与LPS+HI组相比,LPS+HI+Xe1组脑组织中mi R-210的表达在48h和72h显着升高,差异有统计学意义（p<0.05）,而LPS+HI+Xe2组和LPS+HI+Xe3组脑组织中的mi R-210表达在各时间点差异无统计学意义（p>0.05）;与LPS+HI+Xe1组相比,LPS+HI+Xe2组脑组织中的mi R-210表达在24h及72h显着下降,差异有统计学意义（p<0.05）,LPS+HI+Xe3组脑组织中的mi R-210表达在0h、24h、48h及72h均显着下降,差异有统计学意义（p<0.05）。并且各组中的mi R-210在各时间点的表达水平是先升高后降低,在48小时达高峰。（4）Western blot检测HIF-1α蛋白含量:LPS+HI组新生大鼠在0h、24h、48h及72h脑组织中HIF-1α表达均较NS组显着升高,差异有统计学意义（p<0.05）;与LPS+HI组相比,LPS+HI+Xe1组、LPS+HI+Xe2组和LPS+HI+Xe3组脑组织中HIF-1α水平在0h、24小时和72h均明显升高,差异有统计学意义（p<0.05）。与LPS+HI+Xe1组和LPS+HI+Xe2组相比,LPS+HI+Xe3组脑组织中的HIF-1a表达在24h明显下降,差异有统计学意义（p<0.05）,并且各组中的HIF-1α在各时间点的表达水平是先升高后降低,在24小时达高峰。结论:（1）新生大鼠脑白质损伤后,脑室周围组织HIF-1α的表达增加,mi R-210的表达水平增加。（2）脑白质损伤新生大鼠给予吸入氙气干预后,mi R-210的表达上调,增加并稳定HIF-1α蛋白表达水平,减轻脑白质损伤,与脑损伤时间相关。（3）氙气治疗新生大鼠脑白质损伤时间窗至少为5小时,且越早干预效果越好。
倪勇[6]（2018）在《抑制RIP1激酶增强缺血性星形胶质细胞溶酶体膜稳定性的作用及其依赖Hsp70.1B调节的机制》文中指出目的:本实验室前期研究表明,药理或者基因敲低抑制RIP1激酶（Receptor interacting protein kinase,RIP1K）的表达对缺血性脑中风诱导的星形胶质细胞缺血性损伤可发挥保护作用,其发挥的保护作用的机制与其抑制溶酶体内cathepsins的激活和释放有关,由此提示抑制RIP1K的表达其作用机制可能与稳定缺血性星形胶质细胞溶酶体膜有关。因此,本课题旨在进一步深入研究抑制RIP1K的表达后稳定缺血性星形胶质细胞溶酶体膜的作用及其分子信号机制。方法:在体内实验中,在大鼠上通过阻塞大脑中动脉建立永久性阻塞（Permanent cerebral artery occlusion,pMCAO）模型;在体外实验中,培养原代星形胶质细胞,传代后通过糖氧剥夺（Oxygen-glucose deprivation,OGD）建立缺血性星形胶质细胞损伤模型,并通过药理（Nec-1）或者基因敲低（Knockdown of RIP1K）在体内、外抑制RIP1K表达。利用透射电镜观察缺血损伤中星形胶质细胞以及溶酶体形态变化以及利用Annexin-V-FITC和PI染色检测RIP1K基因敲低对缺血诱导的星形胶质细胞坏死和凋亡的影响,同时采用Acridine Orange（AO）染色方法检测溶酶体膜的稳定性。利用基因芯片法、Western Blotting法、免疫组织化学和细胞免疫荧光法检测RIP1K基因敲低后Hsp70.1B（Heat shock protein 70.1B,Hsp70.1B）表达和分布的变化。采用基因（shRNA Hsp70.1B）抑制Hsp70.1B表达,观察Hsp70.1B基因敲低后对pMCAO诱导的脑梗死体积、行为学症状以及星形胶质细胞溶酶体膜稳定性的影响,由此了解Hsp70.1B在缺血性损伤过程发挥的作用。利用Western Blotting法、免疫组织化学和细胞免疫荧光法观察RIP1K基因敲低后对缺血性星形胶质细胞Hsp70.1B的表达具有调控作用的蛋白,比如Hsp90（heat shock protein 90,Hsp90）和Hsf1（heat shock factor1,Hsf1）以及μ-Calpain（μ-钙蛋白酶）蛋白的表达以及分布的变化情况,由此进一步探讨RIP1K基因敲低对Hsp70.1B表达的调控机制。结果:（1）Western Blotting结果显示:在体内和体外实验中发现RIP1K、Hsf1和Hsp70.1B在非缺血状态下表达水平低,缺血后蛋白表达开始上调,缺血6 h后达到峰值,缺血12h后表达降低但仍保持在较高水平。而Hsp90与RIP1K、Hsf1和Hsp70.1B的表达时间点变化存在较大区别,在非缺血状态下Hsp90已经在较高水平,缺血后Hsp90表达下调,缺血6 h后明显降低,12 h后进一步降低。（2）透射电镜结果显示RIP1K敲低后星形胶质细胞的细胞结构以及细胞器溶酶体膜结构较pMCAO组更加完整;Annexin-V-FITC和PI染色结果显示RIP1K敲低后缺血性星形胶质细胞凋亡和坏死较OGD组明显减少;AO染色结果亦表明RIP1K敲低后星形胶质细胞溶酶体膜完整性增加。以上结果提示:基因抑制RIP1K对缺血性星形胶质细胞溶酶体膜具有保护作用。（3）基因芯片结果显示:RIP1K敲低引起缺血性星形胶质细胞表达Hsp70.1B蛋白的Hspa1b基因显着上调;同时Western Blotting、免疫组织化学以及细胞免疫荧光结果显示:RIP1K基因敲低导致缺血性星形胶质细胞Hsp70.1B的表达进一步增加,且主要分布在溶酶体上。进一步的研究发现:Hsp70.1B敲低增加pMCAO诱导的大鼠的脑梗死体积及加重行为学症状;AO染色结果表明Hsp70.1B基因敲低后,缺血性星形胶质细胞溶酶体膜完整性进一步破坏。以上结果提示:基因抑制RIP1K通过上调溶酶体膜Hsp70.1B水平,发挥保护缺血性星形胶质细胞溶酶体膜的作用,即抑制RIP1K保护缺血性星形胶质细胞溶酶体膜的作用是Hsp70.1B依赖性的。（4）进一步利用Western Blotting、免疫共沉淀法,免疫组织化学以及细胞免疫荧光法检测对Hsp70.1B具有调控作用的相关蛋白（Hsp90,Hsf1及μ-Calpain）的表达和分布。结果发现:RIP1K敲低进一步减少缺血性星形胶质细胞细胞浆内Hsp90水平及其与Hsf1的结合,进一步促进Hsf1入核增加。但是对μ-Calpain的表达和分布未见明显影响。以上结果提示:基因抑制RIP1K通过减少缺血性星形胶质细胞细胞浆内Hsp90水平及其与Hsf1的结合,促进Hsf1入核增加,从而增加Hsf1靶基因Hsp70.1B水平,而保护缺血性星形胶质细胞溶酶体膜。结论:RIP1K基因敲低具有提高缺血性星形胶质细胞溶酶体膜稳定性的作用;RIP1K基因敲低促进溶酶体膜稳定性的机制可能与进一步促进缺血性星形胶质细胞溶酶体上Hsp70.1B的表达有关;RIP1K基因敲低对Hsp70.1B的调控可能与进一步抑制缺血性星形胶质细胞细胞浆内Hsp90的表达及其与Hsf1的结合,促进Hsf1入核增多有关。
孙欣[7]（2016）在《缺血缺氧性脑损伤后分子伴侣发育依赖性调节的研究》文中研究说明缺血缺氧性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE）是由多种原因引起的脑组织缺血缺氧所导致的脑部病变。该病在任何年龄阶段均可发生,由于缺血缺氧性脑病能够引起神经元的死亡和神经功能缺失,导致不良预后,因此是神经系统疾病防治的重点之一。以往的研究发现缺血缺氧所导致的脑损伤程度因神经元成熟度的不同而有所区别,未发育成熟的大脑比成熟的大脑对缺血缺氧损伤的抵抗能力更强,然而其潜在的机制仍不明确的。所以,探讨不同发育程度的大脑在缺血缺氧损伤后应激反应的区别对提高缺血缺氧性脑病的治疗效果具有积极的意义。在本研究中,我们从缺血缺氧脑损伤后的热休克反应入手,主要进行了两部分实验,在实验的第一部分,我们探讨了缺血缺氧性脑损伤后分子伴侣在不同发育阶段脑组织中的差异性表达,以及未成熟和成熟脑在缺血缺氧损伤后HSF1在不同亚细胞机构中的差异性表达;在实验的第二部分,我们探讨了在非应激状态下,分子伴侣在不同发育阶段大脑中的原始表达水平。通过该项研究,进一步揭示了缺血缺氧性脑损伤的发病机制,为成人和新生儿在缺血缺氧损伤后治疗的不同靶点提供研究基础和理论依据。第一部分缺血缺氧性脑损伤后分子伴侣和HSF1发育依赖性表达的研究目的:探讨缺血缺氧损伤后不同发育程度大脑中分子伴侣和HSF1的差异性表达。方法:（1）分别选取P7（出生后7天）和P26（出生后26天）Sprague-Dawley大鼠,采用Rice-Vannucci法建立缺血缺氧脑损伤的动物模型。于麻醉下结扎左侧颈总动脉,术后恢复1小时,将实验动物置于37℃恒温水浴缺氧舱中,输入氧浓度为8%的氮氧混合气体,P7组动物缺氧时间为1h,P26组动物缺氧时间为30min,以保证两组实验动物缺氧损伤程度的一致性。然后将实验动物置于常温空气状态恢复。分别选择缺血缺氧后30min,4h和24h留取样本进行实验分析。（2）对P7组和P26组不同恢复时间的脑组织采用原位杂交技术分别检测HSP70、HSP60、GRP78的m RNA表达。（3）分别提取P7组和P26组不同恢复时间点的脑组织蛋白质,采用免疫印迹法对HSP70、HSP60、GRP78的蛋白质表达进行检测分析。（4）分别分离P7组和P26组不同恢复时间点的脑组织亚细胞结构,采用免疫印迹法对HSF1蛋白质的差异性表达和核转位进行检测分析。（5）采用共聚焦显微镜观察P7组和P26组HI后不同恢复时间的脑组织HSP70和HSF1的免疫组织化学荧光表达。结果:（1）在缺血缺氧性脑损伤后,P26缺血缺氧组和P7缺血缺氧组HSP70 m RNA的表达增高主要发生在损伤大脑半球同侧的整个皮层,纹状体、海马和部分皮层下区域;在P26缺血缺氧组,HSP70 m RNA在HI后的30min表达开始增高,4h时达到高峰,24h时HSP70m RNA水平仍较对照组升高,但较缺血缺氧性脑损伤后4h有所下降。缺血缺氧性脑损伤后P7缺血缺氧组HSP70 m RNA的表达模式与P26缺血缺氧组相似,但与P26缺血缺氧组相比,缺血缺氧性脑损伤后HSP70 m RNA在P26大脑样本中增高显着,P7缺血缺氧组与P26缺血缺氧组组间比较差异有显着性。在缺血缺氧脑损伤后,P26缺血缺氧组HSP60m RNA表达水平在缺血缺氧损伤后30min开始升高,4h和24h均持续增加。但在P7缺血缺氧组,HSP60m RNA的表达与对照组相比变化不明显;在缺血缺氧脑损伤后,GRP78在P26缺血缺氧组和P7缺血缺氧组中的变化与HSP60m RNA大致相同,均没有HSP70m RNA的表达增加显着。（2）在缺血缺氧脑损伤后,P26缺血缺氧组大脑样本中HSP70蛋白的在损伤后4h和24h表达明显增加,但P7缺血缺氧组中只在损伤后24h有极微弱的增加。HSP60蛋白和GRP78的蛋白表达在缺血缺氧脑损伤后没有明显变化。（3）在缺血缺氧脑损伤后,P26缺血缺氧组HSF1蛋白表达并进行了重新分配,在缺血缺氧损伤后的30min、4h和24h,HSF1从细胞浆结构（S3）向细胞核结构（P1）发生了转移。这种HSF1核转位的现象在P26缺血缺氧组更为显着。而在P7缺血缺氧组,HSF1的核转位现象并不明显,虽然在缺血缺氧损伤后的30min,细胞浆结构（S3）中的HSF1蛋白表达有所减少,但HSF1蛋白表在细胞核结构（P1）中却没有明显的增加。（4）在缺血缺氧脑损伤后的30min,P26缺血缺氧组HSF1蛋白免疫荧光表达在皮层、海马CA1和齿状核区域的细胞核内缓慢增加,在缺血缺氧损伤后的4h到24h表达稳定上升。与之相对应,在缺血缺氧脑损伤后,在P26缺血缺氧组HSP70蛋白免疫荧光表达在HI后的4h也发生了上调,但与HSF1相比,在皮质、海马CA1和齿状核区域细胞质内的表达增加相对延迟些。P7缺血缺氧组样本中HSF1蛋白免疫荧光表达水平和模式的变化并未发生在皮层、海马CA1和齿状核区域,即在损伤后的30min、4h和24h HSF1均未见明显变化。另外,通过进一步的研究发现,P7缺血缺氧组在缺血缺氧脑损伤后HSP70蛋白免疫荧光表达的微弱增加主要发生在小胶质细胞中。结论:（1）与未发育成熟的脑组织相比,在缺血缺氧脑损伤后,发育成熟的脑组织中细胞的热休克反应更加强烈,提示缺血缺氧脑损伤后发生的热休克反应呈发育依赖性。（2）与未成熟脑组织相比,在缺血缺氧脑损伤后4h,发育成熟的脑组织分子伴侣m RNA表达水平显着增加,尤其是在细胞浆中表达的HSP70更为明显。（3）与未成熟脑组织相比,在缺血缺氧脑损伤后24h,成熟脑组织HSP70蛋白质的表达水平显着增高,与HSP70 m RNA的上调反应时间相比较,HSP70蛋白表达上调是延迟的。提示这种蛋白质表达的延迟可能是成熟脑较未成熟脑对缺血缺氧损伤耐受差的原因之一。（4）与未成熟脑组织相比,在缺血缺氧脑损伤后,HSF1仅在成熟脑组织中发生了核转位,HSF1向细胞核转移,从而促进热休克蛋白的合成。第二部分不同发育程度大脑分子伴侣原始水平差异性的研究目的:探讨在非应激的正常状态下,不同发育程度的大脑分子伴侣原始水平的表达差异。方法:分别选取P7（出生后7天）和P26（出生后26天）Sprague-Dawley大鼠。液氮冷冻后匀浆提取脑组织蛋白,采用免疫印迹法对P7组和P26组脑组织中热休克因子HSF1和分子伴侣HSC70、HSP40、GRP78、GPR94、PDI和HSP60的原始水平进行检测分析。结果:（1）P26组脑组织样本中热休克因子HSF1的水平明显高于P7组。（2）在P7组和P26组脑组织样本中,位于细胞浆中的分子伴侣HSC70和HSP40的水平几乎相同。（3）位于内质网中的分子伴侣和折叠酶GRP78、GRP94和PDI的水平在P26组脑组织样本中要低于P7组。（4）位于线粒体基质的热休克蛋白HSP60的水平在P26组脑组织样本中要明显高于P7组。结论:（1）与未成熟脑组织相比,HSF1在成熟脑组织中的原始水平显着增高。（2）分子伴侣HSC70和HSP40的水平在成熟脑组织和未成熟脑组织中的原始水平几乎相同。（3）与未成熟脑组织相比,成熟脑组织中HSP60的原始水平显着增高。（4）与未成熟脑组织相比,成熟脑组织中GRP78、GRP94和PDI的原始水平明显降低。
王小引,付云,司道文,王俐,郭学鹏[8]（2013）在《孕酮在脑缺血大鼠TNF-α和IL-6引起脑损伤中的作用》文中提出目的观察孕酮在炎症因子TNF-α和IL-6引起新生鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用,进一步探讨孕酮神经保护作用的分子机制。方法 96只7日龄新生Wistar大鼠随机分成4组,正常对照组、假手术组、缺氧缺血组、药物预防组。缺氧缺血组和药物预防组动物先行左侧颈总动脉结扎术,然后将动物置于37℃恒温的密闭容器中,以1.5L/min的速度吸入80ml/L氧气和920ml/L氮气混合气体2.5h建立缺氧缺血脑病动物模型。药物预防组动物于建立模型前30min按8mg/kg腹腔注射0.5g/L孕酮溶液。采用ELISA法检测脑组织中TNF-α和IL-6含量的变化,RT-PCR检测TNF-α和IL-6 mRNA的表达。结果缺氧缺血组脑组织中炎症因子TNF-α和IL-6含量在缺氧缺血后6h、24h、48h、72h明显高于对照组和假手术组大鼠（P<0.05）,且在缺氧后24h升到最高点,以后逐渐下降,至7d两者差异不显着,药物预防组在缺氧缺血后各时间点均低于缺氧缺血组（P<0.05）。且缺氧24h后缺氧缺血组脑组织TNF-α、IL-6 mRNA的表达明显高于正常对照组和假手术组,药物预防组mRNA的表达明显低于缺氧缺血组（P<0.05）。结论孕酮可以保护新生鼠缺氧缺血后引起的脑损伤,其作用机制与抑制炎症因子TNF-α和IL-6 mRNA的表达以及抑制TNF-α和IL-6的生成有关。
王瑞娇[9]（2012）在《三七总皂甙对新生SD大鼠窒息致脑损伤后HO-1及Bax表达影响的实验研究》文中研究指明目的：通过三七总皂甙（PNS）干预常压窒息模型新生SD大鼠,通过免疫组化的方法检测窒息致脑损伤后脑组织中HO-1及Bax蛋白在各个时间点的表达,探讨三七总皂甙对缺氧缺血性脑损伤后HO-1蛋白及Bax蛋白表达的影响,同时进一步探讨三七总皂甙对缺氧缺血性脑损伤是否具有保护作用及其可能机制,探讨三七总皂甙对缺氧缺血性脑病进行干预及治疗的有效时间窗,为临床指导新生儿窒息致缺氧缺血性脑损伤的治疗寻求新的理论基础。方法：取7-10日龄新生大鼠88只,随机分为3组：对照组（Ⅰ组）；常压窒息模型+腹腔注射生理盐水组（Ⅱ组）,又分为Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅱ3、Ⅱ4、Ⅱ5组（分别为窒息+腹腔注射生理盐水后6h、24h、48h、72h、7d,）；常压窒息模型+腹腔注射三七总皂甙溶液干预组（Ⅲ组）,又分为Ⅲ1、Ⅲ2、Ⅲ3、Ⅲ4、Ⅲ5组（分别为窒息+腹腔注射PNS后6h、24h、48h、72h、7d,）,每组8只新生SD大鼠；Ⅰ组仅将新生大鼠置于同样的磨口瓶中,模拟新生鼠常压窒息过程,但是不塞瓶塞（即不做窒息处理）；Ⅱ组模拟新生鼠常压窒息模型后即刻给予生理盐水（同Ⅲ组PNS等量）进行腹腔注射,操作方法同Ⅲ组；Ⅲ组模拟新生鼠常压窒息模型后即刻给予三七总皂甙溶液100mg/kg行腹腔注射,对Ⅲ2、Ⅲ3、Ⅲ4、Ⅲ5组分别于首次注射后每间隔12小时相同剂量重复腹腔注射。Ⅰ组新生鼠一次性处死,Ⅱ组和Ⅲ组新生鼠分别于窒息后6小时,24小时,48小时,72小时,7天分批断头取脑,脑组织按相应步骤进行固定、石蜡包埋等制成石蜡切片,按步骤行HE染色及进行免疫组化检测HO-1及Bax蛋白的表达情况,观察缺氧缺血性脑损伤后脑组织的病理变化（通过HE染色）,对于两种蛋白的表达阳性率应用卡方检验进行组内比较,配对t检验的统计学方法进行两两比较。结果：（1）通过卡方检验进行组内比较,得出①窒息+NS组各时间点的HO-1蛋白的表达有显着的统计学差异（p<0.01）；②窒息+PNS组各时间点的HO-1蛋白的表达有显着的统计学差异（p<0.01）;③窒息+NS组各时间点的Bax蛋白的表达有统计学差异（p<0.05）；④窒息+PNS组各时间点的Bax蛋白的表达有统计学差异（p<0.05）。（2）通过配对T检验进行组间两两比较,得出①与对照组相比,Ⅱ组HO-1及Ⅲ组HO-1蛋白表达均有明显增加,均是24小时达高峰,后逐渐下降,但7天时仍高于对照组,差异有统计学意义（p<0.05）；②与Ⅱ组相比,相同时间段Ⅲ组HO-1蛋白表达相对较高,差异有统计学意义（p<0.05）；③Ⅱ组及Ⅲ组Bax蛋白表达明显高于对照组（P<0.01）,均是48小时达高峰,后逐渐下降,但7天时仍高于对照组,差异有明显的统计学意义；④相同时间段Ⅲ组Bax蛋白表达明显低于Ⅱ组（P<0.05）,差异有统计学意义。结论：①HO-1蛋白是一种应激性保护蛋白,在正常脑组织中几乎不表达,其在窒息致缺氧缺血性脑病时表达增加,从而对新生SD大鼠缺氧缺血性脑病起到一定的脑保护作用；②Bax是一种凋亡蛋白,在正常脑组织中很少表达,在窒息致新生SD大鼠缺氧缺血性脑病时表达增加,说明其在缺氧缺血性脑病中起到一定的促细胞凋亡的作用,促进脑损伤；③本实验中三七总皂甙增加了HO-1蛋白的表达,降低了凋亡蛋白Bax的表达,说明三七总皂甙可以通过以上的作用起到脑保护作用,提示三七总皂甙对窒息所致的缺氧缺血性脑损伤有明显的脑保护作用。
王雪[10]（2012）在《三七总皂甙对新生鼠窒息致脑损伤时细胞凋亡及BDNF变化影响的实验研究》文中提出目的通过模拟新生鼠常压窒息模型,用三七总皂甙（PNS）干预常压窒息模型新生大鼠,通过检测脑组织细胞凋亡率及脑细胞内脑源性神经营养因子（BDNF）的变化,探讨三七总皂甙对缺氧缺血性脑损伤是否具有保护作用,同时观察细胞凋亡率及BDNF在新生鼠窒息后的变化特点,探讨PNS是否通过增加BDNF的表达、降低脑细胞凋亡率对窒息后脑组织发挥保护作用,并了解PNS治疗窒息后脑损伤的有效时间窗,从而验证一定浓度的PNS对缺氧缺血性脑损伤的保护作用,为临床指导新生儿窒息致缺氧缺血性脑损伤的诊断和治疗寻求新的理论基础。方法取7日龄新生大鼠88只,随机分为3组（对照组、常压窒息模型+生理盐水组、常压窒息模型+PNS干预组）,对照组8只,余每组40只：对照组（Ⅰ组）,仅将新生大鼠置于同样磨口瓶中,模拟新生鼠常压窒息过程,不塞瓶塞（不做窒息处理）；常压窒息模型+生理盐水组（Ⅱ组）,又分为Ⅱ1、 Ⅱ2、 Ⅱ3、Ⅱ4Ⅱ5组（分别为窒息+腹腔注射生理盐水后6h、24h、48h、72h、7d,每组8只）,模拟新生鼠常压窒息模型后即刻给予生理盐水（同Ⅲ组PNS等量）腹腔注射,后每隔12小时重复腹腔注射相同剂量生理盐水；常压窒息模型+PNS干预组（Ⅲ组）,又分为Ⅲ1、Ⅲ2、 Ⅲ3、 Ⅲ4、 Ⅲ5、组（分别为窒息+腹腔注射PNS后6h、24h、48h、72h、7d,每组8只）,模拟新生鼠常压窒息模型后即刻给予PNS100mg/kg腹腔注射,后每隔12小时重复腹腔注射相同剂量PNS液。Ⅰ组新生鼠一次性处死,Ⅱ组和Ⅲ组新生鼠分别于窒息后6小时,24小时,48小时,72小时,7天分批取脑组织,按相应步骤进行固定、石蜡包埋等制成石蜡切片,行HE染色观察脑组织的病理变化,行TUNEL法及免疫组化法测定脑细胞凋亡率及BDNF的水平,最后应用卡方检验、配对样本t检验等统计学方法进行数据分析。结果（1）Ⅰ组与Ⅱ组相比,Ⅱ组细胞凋亡率和BDNF的水平明显增高（P<0.05）且Ⅱ组不同时间点细胞凋亡率和BDNF表达的水平从6小时至48小时为上升趋势,在48小时达高峰,BDNF含量于3天时显着下降,7天时恢复正常；细胞凋亡率持续时间较长,7天时仍高于正常。（2）Ⅲ组与Ⅱ组相比,Ⅲ组细胞凋亡率较Ⅱ组低,Ⅲ1组除外（P>0.05）,Ⅲ组BDNF含量也明显高于Ⅱ组（P<0.05）,Ⅲ组细胞凋亡率及BDNF的表达于7天时均未恢复正常。（3）Ⅲ组与I组相比,细胞凋亡率及BDNF表达水平明显增高（P<0.05）,在48小时达高峰,于7天后未恢复正常。结论（1）三七总皂甙对窒息导致的新生鼠缺氧缺血性脑损伤具有显着的保护作用。（2）在窒息所致缺氧缺血性脑损伤时,BDNF水平在48小时达高峰,未进行PNS干预时,BDNF于7天左右恢复正常；但细胞凋亡率在7天时仍高于正常对照组,说明PNS治疗窒息导致的缺氧缺血损伤应延续至7天以后。总之,本实验结果显示,100mg/kg三七总皂甙可增加窒息所致缺氧缺血性脑损伤时BDNF的表达,两者共同作用,降低神经细胞凋亡率,对窒息导致的新生大鼠缺氧缺血性脑损伤具有一定的保护作用,且药物干预至少应维持到窒息后7天,甚至更久。
二、新生鼠缺氧缺血性脑损伤热休克蛋白70的表达（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、新生鼠缺氧缺血性脑损伤热休克蛋白70的表达（论文提纲范文）
（1）温阳逐瘀汤对肾阳虚证大鼠局灶性脑缺血后微小RNA-210及其靶基因的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物及饲养条件 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验动物饲养条件 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验主要试剂、仪器及器材 |
| 1.3.1 主要试剂 |
| 1.3.2 主要液体及配制方法 |
| 1.3.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物分组及处理 |
| 2.2 实验动物造模方法 |
| 2.2.1 建立肾阳虚证大鼠模型 |
| 2.2.2 建立肾阳虚证大鼠脑缺血模型 |
| 2.3 实验动物给药方法 |
| 2.3.1 氢化可的松琥珀酸钠给药方法 |
| 2.3.2 温阳逐瘀汤给药方法 |
| 2.4 实验动物模型成功评定标准 |
| 2.4.1 肾阳虚证动物模型成功标准 |
| 2.4.2 神经功能损伤评分标准 |
| 2.5 实验动物取材 |
| 2.5.1 肾阳虚证大鼠特异性指标检测标本采集 |
| 2.5.2 脑缺血模型相关指标检测标本采集 |
| 2.6 指标检测 |
| 2.6.1 酶联免疫法检测血浆中cAMP、cGMP的含量 |
| 2.6.2 石蜡切片的制作 |
| 2.6.3 HE染色法检测神经细胞形态学变化 |
| 2.6.4 RT-PCR法检测大鼠脑组织缺血侧皮质区miR-210、Ephrin A3 mRNA表达水平 |
| 2.6.5 Western blot法检测大鼠脑组织缺血侧皮质区Ephrin A3 蛋白表达水平 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 大鼠一般状态观察 |
| 3.1.1 肾阳虚造模后各组大鼠状态观察 |
| 3.1.2 温阳逐瘀汤对大鼠肾阳虚状态的影响 |
| 3.2 大鼠血清中肾阳虚证特异性指标cAMP、cGMP的含量 |
| 3.2.1 氢化可的松注射后大鼠血浆中cAMP、cGMP及其比值量 |
| 3.2.2 温阳逐瘀汤灌胃后各组大鼠血浆cAMP、cGMP含量比较 |
| 3.3 神经功能缺损评分结果 |
| 3.4 HE染色法评估各组大鼠脑组织病理形态学改变 |
| 3.5 实时荧光定量PCR检测大鼠脑组织缺血侧皮质区miR-210 的表达水平 |
| 3.6 实时荧光定量PCR检测大鼠脑组织缺血侧皮质区Ephrin-A3 mRNA的表达水平 |
| 3.7 Western Blot法检测大鼠脑组织缺血侧皮质区Ephrin-A3蛋白表达水平 |
| 4 讨论 |
| 4.1 肾阳虚证的研究背景 |
| 4.1.1 肾阳虚证的历史渊源 |
| 4.1.2 肾阳虚证的现代研究 |
| 4.1.4 肾阳虚证生化指标的选择 |
| 4.2 缺血性脑卒中的治疗探究 |
| 4.2.1 中医对缺血性中风的论治 |
| 4.2.2 西医治疗缺血性脑卒中的方案 |
| 4.3 miR-210 调控参与脑血管生成 |
| 4.3.1 血管生成 |
| 4.3.2 miR-210 与脑血管新生的相关性 |
| 4.4 实验方法与设计 |
| 4.4.1 实验动物的选择 |
| 4.4.2 动物模型的建立 |
| 4.4.3 动物模型的麻醉方法 |
| 4.4.4 取材时间点的选择 |
| 4.5 实验结果分析 |
| 5 存在的问题和不足 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 主要缩略词表 |
| 附录 |
| 综述 微小 RNA-210 在缺血性心脑血管疾病中的研究概况 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（2）基于自噬和炎症探讨“智三针”改善HIBD大鼠认知障碍分子机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 围产期缺氧缺血性脑病的现代医学研究进展 |
| 一、HIE的流行病学现状、诊断和预后 |
| 二、HIE的病理学机制研究进展 |
| 三、HIE的现代医学治疗进展 |
| 第二节 自噬流与NLRP3炎症体介导的焦亡参与HIBD发生发展 |
| 一、自噬流参与调控HIBD神经元死亡 |
| 二、NLRP3炎症体介导的焦亡参与调控HIBD神经元死亡 |
| 三、自噬作用介导NLRP3炎症体活化的机制 |
| 第三节 针灸治疗HIE的研究进展 |
| 一、针灸治疗HIE的临床疗效研究进展 |
| 二、针刺治疗HIE的机制研究进展 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 智三针对HIBD新生大鼠一般生长发育状况的影响 |
| 一、实验用品 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第二节 智三针对HIBD新生大鼠行为学和脑部病理形态的影响 |
| 一、实验用品 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三节 智三针修复HIBD新生大鼠海马区受损神经元的相关分子机制 |
| 一、实验用品 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第四节 智三针调控自噬流抑制HIBD新生大鼠NLRP3炎症体活化的机制 |
| 一、实验用品 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件1:统计学处理合格证明 |
（3）重组人粒细胞集落刺激因子对缺氧缺血新生大鼠运动功能的改善作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 第一章 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验主要设备 |
| 2.1.3 实验主要试剂 |
| 2.1.4 主要溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物分组 |
| 2.2.2 实验材料 |
| 2.2.3 造模方法 |
| 2.2.4 急性期行为学评估 |
| 2.2.5 TTC染色法 |
| 2.2.6 荧光染色法 |
| 2.2.7 Catwalk步态分析 |
| 2.2.8 统计方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 体重增长情况 |
| 3.2 急性期行为学评估 |
| 3.3 TTC染色 |
| 3.4 荧光染色 |
| 3.5 Catwalk步态分析 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第六章 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 中英文缩写词对照表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（4）新生期缺血缺氧对小鼠成年后抑郁症易感性及海马免疫细胞变化的影响（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 新生鼠缺血缺氧性脑损伤模型的建立 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 研究不足与缺陷 |
| 第二部分 抑郁模型的建立与评价 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 研究缺陷与不足 |
| 第三部分 卒中后抑郁海马免疫细胞表达情况 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 研究缺陷与不足 |
| 本课题研究的特点及创新 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（5）氙气调节脑组织中microRNA-210和HIF-1α对新生大鼠脑白质损伤的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 3日龄新生大鼠脑白质损伤模型建立的研究 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品和试剂 |
| 1.3 主要实验仪器及设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验动物的分组与处理 |
| 2.2 HE染色及TUNEL检测评价脑白质损伤 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 氙气对新生大鼠脑白质损伤脑组织microRNA-210和HIF-1α表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品和试剂 |
| 1.3 主要实验仪器及设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验动物的分组与处理 |
| 2.2 HE染色及TUNEL检测评价脑白质损伤 |
| 2.3 RT-PCR检测miR-210 的表达 |
| 2.4 WB检测HIF-1α蛋白的表达水平 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（6）抑制RIP1激酶增强缺血性星形胶质细胞溶酶体膜稳定性的作用及其依赖Hsp70.1B调节的机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 一、研究背景 |
| 二、本课题的研究内容 |
| 三、本课题的创新点 |
| 四、本课题的研究意义和价值 |
| 材料和方法 |
| 1.实验动物 |
| 2.主要试剂 |
| 3.主要仪器 |
| 4.溶液配制 |
| 5.动物实验 |
| 6.细胞实验 |
| 7.统计分析 |
| 第一部分 RIP1K在大脑皮层、星形胶质细胞和神经元中的表达和分布 |
| 结果 |
| 1.RIP1K在大脑皮层、星形胶质细胞和神经元中的表达和分布 |
| 小结 |
| 第二部分 RIP1K基因敲低增加缺血性星形胶质细胞溶酶体膜稳定性 |
| 结果 |
| 1.RIP1K基因敲低增加大鼠大脑皮层缺血性星形胶质细胞溶酶体膜的稳定性 |
| 2.RIP1K基因敲低增加OGD模型中星形胶质细胞溶酶体膜稳定性 |
| 小结 |
| 第三部分 RIP1K基因敲低进一步促进缺血性星形胶质细胞溶酶体膜上Hsp70.1B的表达 |
| 结果 |
| 1.RIP1K基因敲低促进OGD诱导的缺血性星形胶质细胞溶酶体膜Hsp70.1B的表达 |
| 2.RIP1K基因敲低促进pMCAO诱导的的缺血性星形胶质细胞溶酶体膜Hsp70.1B的表达 |
| 小结 |
| 第四部分 Hsp70.1B具有溶酶体膜稳定性作用,对缺血性脑损伤具有保护作用 |
| 结果 |
| 1.Hsp70.1B对pMCAO诱导的缺血性脑损伤具有保护作用 |
| 2.慢病毒转染后Hsp70.1B基因敲低可进一步增加OGD诱导的星形胶质细胞溶酶体膜的通透性,此外拮抗Nec-1对溶酶体具有保护作用 |
| 小结 |
| 第五部分 RIP1K基因敲低后通过Hsp90和Hsf1调控Hsp70.1B的表达 |
| 结果 |
| 1.RIP1K基因敲低进一步降低缺血性星形胶质细胞细胞质内Hsp90的表达,同时促进Hsf1入核 |
| 2.RIP1K基因敲低进一步减少OGD诱导的星形胶质细胞Hsp90的表达，促进Hsf1入核 |
| 小结 |
| 第六部分 RIP1K基因敲低对缺血性星形胶质细胞中μ-Calpain的表达无明显影响 |
| 结果 |
| 1.RIP1K基因敲低对pMCAO大鼠脑皮层缺血区μ-Calpain的表达无明显影响 |
| 2.RIP1K基因敲低对OGD诱导的的缺血性星形胶质细胞μ-Calpain表达无显着影响 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文缩写词表 |
| 攻读硕士学位期间公开发表的论文 |
| 攻读学位期间科研情况 |
| 致谢 |
（7）缺血缺氧性脑损伤后分子伴侣发育依赖性调节的研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 文献综述：分子伴侣与缺血缺氧性脑损伤 |
| 1.2.1 缺血缺氧性脑损伤 |
| 1.2.2 分子伴侣与缺血缺氧性脑损伤 |
| 第2章 实验研究缺血缺氧性脑损伤后分子伴侣发育依赖性调节的研究 |
| 2.1 缺血缺氧性脑损伤后分子伴侣m RNA发育依赖性调节的研究 |
| 2.1.1 前言 |
| 2.1.2 实验分组 |
| 2.1.3 实验设备 |
| 2.1.4 实验试剂 |
| 2.1.5 实验方法 |
| 2.1.6 实验结果 |
| 2.2 缺血缺氧性脑损伤后分子伴侣蛋白质和HSF1核转位发育依赖性调节的研究 |
| 2.2.1 前言 |
| 2.2.2 实验分组 |
| 2.2.3 实验设备 |
| 2.2.4 实验试剂 |
| 2.2.5 实验方法 |
| 2.2.6 实验结果 |
| 2.3 缺血缺氧性脑损伤后分子伴侣HSP70和HSF1蛋白免疫荧光表达发育依赖性调节的研究 |
| 2.3.1 前言 |
| 2.3.2 实验动物及分组 |
| 2.3.3 实验设备 |
| 2.3.4 实验试剂 |
| 2.3.5 实验方法 |
| 2.3.6 实验结果 |
| 2.4 非应激的正常情况下分子伴侣和折叠酶原始水平发育依赖性调节的研究 |
| 2.4.1 前言 |
| 2.4.2 实验动物及分组 |
| 2.4.3 实验器材 |
| 2.4.4 实验试剂 |
| 2.4.5 实验方法 |
| 2.4.6 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 缺血缺氧性脑损伤后HSF1核转位及发育依赖性表达的差异 |
| 2.5.2 缺血缺氧性脑损伤后细胞质、内质网和线粒体分子伴侣m RNA发育依赖性表达的差异 |
| 2.5.3 缺血缺氧损伤后未成熟脑组织内热休克蛋白的表达与细胞损伤程度的关系 |
| 2.5.4 非应激正常条件下分子伴侣和折叠酶原始水平发育依赖性表达的差异 |
| 2.5.5 缺血缺氧性脑损伤后不同发育程度脑组织应激反应差异性研究的意义 |
| 第3章 结论 |
| 3.1 结论 |
| 3.1.1 缺血缺氧性脑损伤后分子伴侣和HSF1发育依赖性表达的研究 |
| 3.1.2 不同发育程度大脑分子伴侣原始水平差异性的研究 |
| 3.2 创新与展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（8）孕酮在脑缺血大鼠TNF-α和IL-6引起脑损伤中的作用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物来源及分组 |
| 1.2 动物模型的建立 |
| 1.3 观察指标及测定 |
| 1.3.1 取材与处理 |
| 1.3.2 RT-PCR检测各组缺氧24h脑组织 |
| 1.4 统计学处理 |
| 2 结 果 |
| 2.1 各组新生鼠缺氧缺血后不同时间脑组织中TNF-α、IL-6的变化及孕酮的影响 |
| 2.2 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后TNF-α、IL-6 |
| 3 讨论 |
（9）三七总皂甙对新生SD大鼠窒息致脑损伤后HO-1及Bax表达影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在校期间发表的论文 |
| 致谢 |
（10）三七总皂甙对新生鼠窒息致脑损伤时细胞凋亡及BDNF变化影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
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四、新生鼠缺氧缺血性脑损伤热休克蛋白70的表达（论文参考文献）
- [1]温阳逐瘀汤对肾阳虚证大鼠局灶性脑缺血后微小RNA-210及其靶基因的影响[D]. 孙诗杰. 广西中医药大学, 2021(02)
- [2]基于自噬和炎症探讨“智三针”改善HIBD大鼠认知障碍分子机制[D]. 秦玮珣. 广州中医药大学, 2020(06)
- [3]重组人粒细胞集落刺激因子对缺氧缺血新生大鼠运动功能的改善作用[D]. 林泽璇. 南方医科大学, 2020(01)
- [4]新生期缺血缺氧对小鼠成年后抑郁症易感性及海马免疫细胞变化的影响[D]. 曾贤威. 昆明医科大学, 2019(06)
- [5]氙气调节脑组织中microRNA-210和HIF-1α对新生大鼠脑白质损伤的保护作用研究[D]. 尹向云. 青岛大学, 2018(07)
- [6]抑制RIP1激酶增强缺血性星形胶质细胞溶酶体膜稳定性的作用及其依赖Hsp70.1B调节的机制[D]. 倪勇. 苏州大学, 2018(12)
- [7]缺血缺氧性脑损伤后分子伴侣发育依赖性调节的研究[D]. 孙欣. 吉林大学, 2016(08)
- [8]孕酮在脑缺血大鼠TNF-α和IL-6引起脑损伤中的作用[J]. 王小引,付云,司道文,王俐,郭学鹏. 中风与神经疾病杂志, 2013(04)
- [9]三七总皂甙对新生SD大鼠窒息致脑损伤后HO-1及Bax表达影响的实验研究[D]. 王瑞娇. 昆明医科大学, 2012(11)
- [10]三七总皂甙对新生鼠窒息致脑损伤时细胞凋亡及BDNF变化影响的实验研究[D]. 王雪. 昆明医科大学, 2012(11)